Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ОСПЫ

Изобретение относится к области ветеринарии и медицины, в частности к средствам, обладающим противооспенным действием, и может быть использовано для профилактики и лечения заболеваний вызванных поксвирусами.

По данным ВОЗ, смертность от инфекций продолжает занимать лидирующее место на земном шаре, и фактически инфекционные болезни уносят жизни около 15 миллионов человек ежегодно. Вторая половина XX и начало XXI столетия характеризуются увеличением частоты заболеваний, вызываемых вирусами, а также выявлением вирусной природы болезней неясной ранее этиологии и открытием новых вирусов, патогенных для человека.

Другим аспектом этой проблемы является возникновение лекарственной устойчивости у хорошо известных вирусных агентов. Это делает необходимым постоянное тестирование современных вирусных штаммов на устойчивость к химиопрепаратам и требует проведения антивирусной терапии при помощи нескольких антивирусных препаратов с различными механизмами противовирусного действия для исключения формирования лекарственно устойчивых вирусных штаммов. Поэтому вопрос о необходимости разработки и поиска новых антивирусных препаратов представляется крайне важным и особо актуальным.

Существование связанных с грызунами природных очагов, по крайней мере 6 из 11 известных вирусов, входящих в род Orthopoxvirus; нарастающее обострение эпидемической ситуации по оспе обезьян в экваториальной Африке с увеличением смертности среди людей в среднем на 9,8%; возможность сохранения вируса в трупах людей, захороненных в вечной мерзлоте Евразии и Америки; угроза биотерроризма за счет неучтенных запасов вируса, сохранившихся где-либо и у кого-либо; отсутствие у населения поствакцинального иммунитета после прекращения 30 лет назад вакцинации и производства вакцин по рекомендации ВОЗ - все это делает риск обострения эпидемической ситуации с катастрофическими последствиями в настоящее время и в обозримом будущем даже выше, чем 20-30 лет назад [1].

Антивирусные препараты, возможно, будут основными инструментами для минимизации катастрофических последствий внезапного обострения эпидемической ситуации.

В связи с вышеизложенным, а также с тем, что научное сообщество и органы здравоохранения не располагают эффективными, адаптированными для массового применения профилактическими и лечебными препаратами против поксвирусов, необходимы исследования по поиску и разработке таких препаратов.

При разработке противооспенных препаратов для первоначального скрининга эффективности препаратов, в том числе и против вируса натуральной оспы, могут использоваться другие поксвирусы, в частности на животных моделях - вирус эктромелии. На конечных этапах оценки действия препаратов для подтверждения полученных предварительных результатов необходимо использование живого вируса натуральной оспы.

Целью настоящего изобретения является быстрое и эффективное лечение заболеваний вызванных поксвирусами простым в производстве препаратом с низкой себестоимостью.

Цель достигается тем, что в качестве противооспенного средства используется природный высокоэффективный индуктор интерферона, извлекаемый из сухих пекарских дрожжей с помощью оттитрованной щелочью олеиновой кислоты или с помощью додецилсульфата натрия путем обработки выделенной РНК олеиновой кислотой - мылкий амфифильный комплекс высокополимерной РНК Saccharomyces cerevisiae с олеатом натрия (предполагаемое рыночное название - Виталанг-2). Представляется актуальным изучение его действия в отношении вируса эктромелии в моделях на лабораторных животных.

Пример осуществления предлагаемого способа

Животные

В работе использовали здоровых половозрелых животных - беспородных белых мышей обоего пола массой тела 14-16 г, полученных из питомника лабораторных животных ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор». Все эксперименты проводились в соответствии с [2].

В эксперименте было использовано 168 мышей, из них 126 животных - в опыте (18 групп по 7 мышей в группе) и 42 - в контроле (6 групп по 7 мышей в группе).

Препарат Виталанг-2

Виталанг-2 получали по способу [3], стерилизовали по методу [4], растворяли в стерильном физиологическом растворе (ФР), встряхивая 15-30 мин в день проведения эксперимента.

Вирусы

В работе использовали вирус эктромелии, штамм К-1, полученный из отдела коллекции микроорганизмов ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» и наработанный на перевиваемой клеточной линии Vero (клетки почки зеленой мартышки) с титром 9,33×10⁵ БОЕ/мл.

Испытание противовирусной активности препарата Виталанг-2 (профилактическая схема)

Препарат Виталанг-2 вводили мышам внутримышечно трехкратно в течение дня с интервалом в 4 ч (11.00, 15.00 и 19.00) в суммарной дозе 0,1 мг/кг массы животного (3 группы по 7 мышей в группе), 0,5 мг/кг массы (3 группы по 7 мышей в группе) и 1,0 мг/кг массы (3 группы по 7 мышей в группе) в объеме 200 мкл/одно введение. В качестве отрицательного контроля использовали 3 группы по 7 мышей, которым внутримышечно вводили ФР в объеме 200 мкл/одно введение три раза в течение дня в те же сроки, что и в опыте. Через 1 ч после третьего введения всех препаратов (20.00) животных заражали интраназально под эфирным наркозом летальной дозой (10 LD₅₀, содержащих 2,57 lg БОЕ) вируса эктромелии в объеме 40 мкл/мышь. Гибель животных учитывали ежедневно в течение последующих 16 дней, оценивали процент гибели, коэффициент защиты и среднюю продолжительность жизни.

Испытание противовирусной активности препарата Виталанг-2 (лечебная схема)

Мышей опытных и контрольных групп инфицировали интраназально под эфирным наркозом летальной дозой (10 LD₅₀, содержащих 2,57 lg БОЕ) вируса эктромелии в объеме 40 мкл/мышь (10.00).

Через 1 ч (11.00) после инфицирования мышам вводили препарат Виталанг-2 внутримышечно и затем еще дважды в течение дня с интервалом в 4 ч (15.00 и 19.00) в суммарной дозе 0,1 мг/кг массы животного (3 группы по 7 мышей в группе), 0,5 мг/кг массы (3 группы по 7 мышей в группе) и 1,0 мг/кг массы (3 группы по 7 мышей в группе) в объеме 200 мкл/одно введение. В качестве отрицательного контроля использовали 3 группы по 7 инфицированных мышей, которым через 1 ч внутримышечно вводили ФР в объеме 200 мкл/одно введение и затем еще дважды в течение дня с интервалом в 4 ч (15.00 и 19.00) в том же объеме. Гибель животных учитывали ежедневно в течение последующих 16 дней, оценивали процент гибели, коэффициент защиты и среднюю продолжительность жизни.

Статистическая обработка

Статистическую обработку данных проводили с помощью пакета прикладных программ «Statistica 6.0», используя t-критерий Стьюдента, а также U-критерий Манна-Уитни. Достоверность различий средних величин устанавливали с помощью t-критерия Стьюдента при р≤0,05.

Результаты исследований

В связи с тем, что в настоящее время нет ни одного коммерческого противовирусного препарата в отношении поксвирусов, в данных экспериментах не было использовано положительного контроля, а в качестве отрицательного контроля использовали ФР. Достоверное преимущество по количеству выживших животных по сравнению с контролем (19,1% при профилактической и лечебной схемах) наблюдалось как в группах, получавших Виталанг-2 до заражения, так и в группах, получавших данный препарат после заражения мышей летальной дозой (10 LD₅₀) вируса эктромелии. В данных экспериментах защитный эффект зависел от дозы Виталанга-2 (количество выживших мышей составило 28,6; 38,1 и 47,6% - при использовании лечебной схемы и 42,9; 52,4 и 61,9% - при использовании профилактической схемы при дозах препарата - 0,1; 0,5 и 1,0 мг/кг массы животного соответственно). Средняя продолжительность жизни при заражении мышей 10 LD₅₀ вирусом эктромелии во всех группах, получавших Виталанг-2 до заражения и после заражения, за исключением одной группы (при дозе препарата 0,1 мг/кг в профилактической схеме), была достоверно выше, чем в контроле.

Таким образом, препарат Виталанг-2 является эффективным противооспенным средством и после соответствующих доклинических и клинических испытаний может быть рекомендован для лечения заболеваний, вызванных поксвирусами. Лечение можно начинать на любых стадиях болезни, терапевтическая доза - 1 мг/кг массы тела животного или человека.

Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства образования и науки Российской Федерации (Государственный контракт №16.512.11.2018 от 11.02.2011).

Источники информации

1. Львов Д.К., Зверев В.В., Гинцбург А.Л., Маренникова С.С., Пальцев М.А. Натуральная оспа - дремлющий вулкан // Вопросы вирусологии. - 2008. - №4. - С.4-8.

2. Европейская конвенция по защите позвоночных животных, используемых в экспериментальных и других научных целях. Страсбург, 1986.

3. Пат. 2403288 РФ. Способ получения высокополимерной РНК из сухих пекарских дрожжей / Ямковая Т.В., Загребельный С.Н., Панин Л.Е. Ямковой В.И.; опубл. 10.11.2010, Бюл. №31.

4. Пат. 2397988 РФ. Способ терминальной стерилизации высокополимерной дрожжевой РНК / Ямковая Т.В., Кузовкова Е.В., Железнова Ю.П., Загребельный С.Н., Панин Л.Е. Ямковой В.И.; опубл. 27.08.2010, Бюл. №24.