Результат интеллектуальной деятельности: СРЕДСТВО ДЛЯ ДЕЗИНФЕКЦИИ ОБЪЕКТОВ ВЕТЕРИНАРНОГО НАДЗОРА

Предлагаемое изобретение относится к области сельского хозяйства, преимущественно к ветеринарии, и может быть использовано при возникновении и угрозе распространения инфекционных заболеваний.

Известно средство для дезинфекции объектов ветеринарного надзора, содержащее калий пероксомоносульфат, сульфаминовую кислоту, алкилбензолсульфонат, бикарбонат и/или карбонат щелочного металла, пара-толуолсульфонат и краситель - амарант (Патент США №4822512 «Biocidal, particularly virucidal, compositions», МПК C11D 3/48, 1989).

Однако средство недостаточно эффективно.

Техническим результатом изобретения является повышение эффективности целевого продукта за счет увеличения вирулицидной, акарицидной и детоксицирующей активности.

Технический результат достигается в средстве для дезинфекции объектов ветеринарного надзора, содержащем калий пероксомоносульфат, сульфаминовую кислоту, алкилбензолсульфонат, бикарбонат и/или карбонат щелочного металла и пара-толуолсульфонат, отличающемся тем, что дополнительно содержит кетон или кетокислоту, щелочную соль соляной кислоты, резорцин и (C₁₂-C₁₈)-алкилдиметилбетаин, в качестве алкилбензолсульфоната содержит линейный алкилсульфонат натрия или калия при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Заявленное средство содержит

в качестве бикарбоната щелочного металла бикарбонат калия или натрия;

в качестве карбоната щелочного металла карбонат калия или натрия;

в качестве кетона ацетон или метилпируват;

в качестве кетокислоты пировиноградную или левулиновую кислоту;

в качестве щелочной соли соляной кислоты - натрия или калия хлорид.

Заявленное средство дополнительно содержит азокраситель в конечной концентрации 1,0×10^-4-1,0×10^-2 мас.%.

В качестве азокрасителя содержит амарант или кислотный красный 18.

Заявляемое средство для дезинфекции объектов ветеринарного надзора авторами назван «Дезакар».

Известен резорцин - мета-дигидроксибензол. Резорцин применяется в производстве синтетических красителей, некоторых полимеров, в медицине как обеззараживающее средство при лечении кожных заболеваний из-за дубящих свойств. Химическая формула С₆Н₆О₂ /Европейский патент ЕР 0520226. «Композиция акцепторов галогенов». Пункты патентной формулы 7, 17/.

Известен также метилпируват - Methyl Pyruvate, (метил-2-оксопропионат -methyl 2-oxopropionate) /Патент №2389474; МПК А61К 8/04; А61К 8/25; A61Q 19/00; В82В 1/00; опубл. 20.05.2010/.

Известны линейные алкилбензолсульфонаты и, в частности, линейные неразветвленные алкилбензолсульфонаты натрия и калия (Патент РФ №2398012. «Композиции для ухода за бельем при стирке, содержащие тиазолиевый краситель») МПК C11D 3/40, C11D 1/83, С09В 44/20, С09В 69/00, опубл. 27.08.2010). Также известен линейный алкилбензолсульфонат натрия, представляющий собой вязкую бесцветную или светло-желтого цвета жидкость (Сульфонол. СТП 00204872-15-2003П).

Известно также поверхностно-активное вещество C₁₂-C₁₈-алкилдиметилбетаин, такое как бетаин кокосового ореха. Кокосовый бетаин имеется на рынке и поставляется фирмой Seppic под торговым наименованием Amonyl 265®. /Патент РФ 2152984. Дезинфицирующая композиция, способ проведения дезинфекции и протирочный материал, МПК C11D 3/48, C11D 3/39, C11D 1/88, A61L 2/16, C11D 3/39, C11D 3:395, опубл. 20.07.2000/.

Амарант - краситель (моноазокраситель). Темно-красный порошок или гранулят, в воде образует красный раствор. Амарант является анионным красителем. Он может применяться для окрашивания натуральных и синтетических тканей, кожи, бумаги и фенолформальдегидных смол. Как пищевая добавка амарант зарегистрирован под кодом Е-123.

Краситель кислотный красный 18. (CAS No. 2611-82-7). Порошок темно-красного цвета. Химическое название: 1,3-Naphthalenedisulfonic acid, 7-hydroxy-8-[(4-sulfo-l-naphthalenyl)azo]-, trisodium salt. Химическая формула С₂₀Н₁₁N₂Nа₃О₁₀S₃. Как пищевая добавка «краситель кислотный красный 18» зарегистрирована под кодом Е-124.

Наличие детоксицирующей активности в заявляемом средстве для дезинфекции объектов ветеринарного надзора решает проблему загрязнения окружающей среды, что важно для ветеринарии при частом проведении профилактической и вынужденной дезинфекции объектов ветеринарного надзора.

Изобретение иллюстрируется на следующих примерах.

Пример 1.

К 3,0 кг сульфаминовой кислоты добавляют 12,0 кг линейного алкилбензолсульфоната натрия, 2,0 кг бикарбоната калия, 0,5 кг пара-толуолсульфоната, 2,0 кг ацетона, 0,5 кг натрия хлорида, 1,0 кг резорцина, 3,0 кг (С₁₂-С₁₈)-алкилдиметилбетаина и до 100 кг калия пероксомоносульфата, получая состав 1 при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Пример 2.

К 6,0 кг сульфаминовой кислоты добавляют 18,0 кг линейного алкилбензолсульфоната натрия, 7,0 кг бикарбоната калия, 2,0 кг пара-толуолсульфоната, 7,0 кг ацетона, 4,0 кг натрия хлорида, 3,0 кг резорцина, 9,0 кг (С₁₂-С₁₈)-алкилдиметилбетаина и до 100 кг калия пероксомоносульфата, получая состав 2 при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Пример 3.

К 3,0 кг сульфаминовой кислоты добавляют 12,0 кг линейного алкилбензолсульфоната калия, 2,0 кг бикарбоната натрия, 0,5 кг пара-толуолсульфоната, 2,0 кг метилпирувата, 0,5 кг калия хлорида, 1,0 кг резорцина, 3,0 кг (С₁₂-С₁₈)-алкилдиметилбетаина и до 100 кг калия пероксомоносульфата, получая состав 3 при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Пример 4.

К 6,0 кг сульфаминовой кислоты добавляют 18,0 кг линейного алкилбензолсульфоната калия, 7,0 кг бикарбоната натрия, 2,0 кг пара-толуолсульфоната, 7,0 кг метилпирувата, 4,0 кг калия хлорида, 3,0 кг резорцина, 9,0 кг (С₁₂-С₁₈)-алкилдиметилбетаина и до 100 кг калия пероксомоносульфата, получая состав 4 при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Пример 5.

К 3,0 кг сульфаминовой кислоты добавляют 12,0 кг линейного алкилбензолсульфоната натрия, 2,0 кг карбоната калия, 0,5 кг пара-толуолсульфоната, 2,0 кг пировиноградной кислоты, 0,5 кг натрия хлорида, 1,0 кг резорцина, 3,0 кг (С₁₂-С₁₈)-алкилдиметилбетаина и до 100 кг калия пероксомоносульфата, получая состав 5 при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Пример 6.

К 6,0 кг сульфаминовой кислоты добавляют 18,0 кг линейного алкилбензолсульфоната натрия, 7,0 кг карбоната калия, 2,0 кг пара-толуолсульфоната, 7,0 кг пировиноградной кислоты, 4,0 кг натрия хлорида, 3,0 кг резорцина, 9,0 кг (С₁₂-С₁₈)-алкилдиметилбетаина и до 100 кг калия пероксомоносульфата, получая состав 6 при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Пример 7.

К 3,0 кг сульфаминовой кислоты добавляют 12,0 кг линейного алкилбензолсульфоната натрия, 2,0 кг карбоната натрия, 0,5 кг пара-толуолсульфоната, 2,0 кг левулиновой кислоты, 0,5 кг натрия хлорида, 1,0 кг резорцина, 3,0 кг (С₁₂-С₁₈)-алкилдиметилбетаина и до 100 кг калия пероксомоносульфата, получая состав 7 при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Пример 8.

К 6,0 кг сульфаминовой кислоты добавляют 18,0 кг линейного алкилбензолсульфоната натрия, 7,0 кг карбоната натрия, 2,0 кг пара-толуолсульфоната, 7,0 кг левулиновой кислоты, 4,0 кг натрия хлорида, 3,0 кг резорцина, 9,0 кг (С₁₂-С₁₈)-алкилдиметилбетаина и до 100 кг калия пероксомоносульфата, получая состав 8 при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Пример 9.

К 3,0 кг сульфаминовой кислоты добавляют 12,0 кг линейного алкилбензолсульфоната натрия, 2,0 кг смеси бикарбоната калия и карбоната калия, взятых в массовом соотношении, равном 1:3, соответственно, 0,5 кг пара-толуолсульфоната, 2,0 кг пировиноградной кислоты, 0,5 кг натрия хлорида, 1,0 кг резорцина, 3,0 кг (С₁₂-С₁₈)-алкилдиметилбетаина и до 100 кг калия пероксомоносульфата, получая состав 9 при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Пример 10.

К 6,0 кг сульфаминовой кислоты добавляют 18,0 кг линейного алкилбензолсульфоната натрия, 7,0 кг смеси бикарбоната калия и карбоната калия, взятых в массовом соотношении, равном 1:1, соответственно, 2,0 кг пара-толуолсульфоната, 7,0 кг пировиноградной кислоты, 4,0 кг натрия хлорида, 3,0 кг резорцина, 9,0 кг (С₁₂-С₁₈)-алкилдиметилбетаина и до 100 кг калия пероксомоносульфата, получая состав 10 при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Пример 11.

К 3,0 кг сульфаминовой кислоты добавляют 12,0 кг линейного алкилбензолсульфоната натрия, 2,0 кг смеси бикарбоната калия и карбоната натрия, взятых в массовом соотношении, равном 1:3, соответственно, 0,5 кг пара-толуолсульфоната, 2,0 кг ацетона, 0,5 кг натрия хлорида, 1,0 кг резорцина, 3,0 кг (С₁₂-С₁₈)-алкилдиметилбетаина и до 100 кг калия пероксомоносульфата, получая состав 11 при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Пример 12.

К 6,0 кг сульфаминовой кислоты добавляют 18,0 кг линейного алкилбензолсульфоната натрия, 7,0 кг смеси бикарбоната калия и карбоната натрия, взятых в массовом соотношении, равном 1:1, соответственно, 2,0 кг пара-толуолсульфоната, 7,0 кг ацетона, 4,0 кг натрия хлорида, 3,0 кг резорцина, 9,0 кг (С₁₂-С₁₈₎алкилдиметилбетаина и до 100 кг калия пероксомоносульфата, получая состав 12 при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Пример 13.

К 3,0 кг сульфаминовой кислоты добавляют 12,0 кг линейного алкилбензолсульфоната натрия, 2,0 кг смеси бикарбоната натрия и карбоната натрия, взятых в массовом соотношении, равном 1:3, соответственно, 0,5 кг пара-толуолсульфоната, 2,0 кг левулиновой кислоты, 0,5 кг калия хлорида, 1,0 кг резорцина, 3,0 кг (С₁₂-С₁₈)-алкилдиметилбетаина и до 100 кг калия пероксомоносульфата, получая состав 13 при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Пример 14.

К 6,0 кг сульфаминовой кислоты добавляют 18,0 кг линейного алкилбензолсульфоната натрия, 7,0 кг смеси бикарбоната натрия и карбоната натрия, взятых в массовом соотношении, равном 1:1, соответственно, 2,0 кг пара-толуолсульфоната, 7,0 кг левулиновой кислоты, 4,0 кг калия хлорида, 3,0 кг резорцина, 9,0 кг (С₁₂-С₁₈)-алкилдиметилбетаина и до 100 кг калия пероксомоносульфата, получая состав 14 при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Пример 15.

К 3,0 кг сульфаминовой кислоты добавляют 12,0 кг линейного алкилбензолсульфоната натрия, 2,0 кг смеси бикарбоната натрия и карбоната калия, взятых в массовом соотношении, равном 1:3, соответственно, 0,5 кг пара-толуолсульфоната, 2,0 кг метилпирувата, 0,5 кг натрия хлорида, 1,0 кг резорцина, 3,0 кг (С₁₂-С₁₈)-алкилдиметилбетаина и до 100 кг калия пероксомоносульфата, получая состав 15 при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Пример 16.

К 6,0 кг сульфаминовой кислоты добавляют 18,0 кг линейного алкилбензолсульфоната натрия, 7,0 кг смеси бикарбоната натрия и карбоната калия, взятых в массовом соотношении, равном 1:1, соответственно, 2,0 кг пара-толуолсульфоната, 7,0 кг метилпирувата, 4,0 кг натрия хлорида, 3,0 кг резорцина, 9,0 кг (С₁₂-С₁₈)-алкилдиметилбетаина и до 100 кг калия пероксомоносульфата, получая состав 16 при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Пример 17.

К 3,0 кг сульфаминовой кислоты добавляют 12,0 кг линейного алкилбензолсульфоната натрия, 2,0 кг смеси бикарбоната натрия и карбоната калия, взятых в массовом соотношении, равном 1:3, соответственно, 0,5 кг пара-толуолсульфоната, 2,0 кг метилпирувата, 0,5 кг натрия хлорида, 1,0 кг резорцина, 3,0 кг (C₁₂-C₁₈)-алкилдиметилбетаина и до 100 кг калия пероксомоносульфата, получая состав при следующем соотношении компонентов, мас.%:

В полученный состав дополнительно вводят азокраситель - амарант в конечной концентрации 1,0×10^-4 мас.%, получая состав 17.

Пример 18.

К 6,0 кг сульфаминовой кислоты добавляют 18,0 кг линейного алкилбензолсульфоната натрия, 7,0 кг смеси бикарбоната натрия и карбоната калия, взятых в массовом соотношении, равном 1:1, соответственно, 2,0 кг пара-толуолсульфоната, 7,0 кг метилпирувата, 4,0 кг натрия хлорида, 3,0 кг резорцина, 9,0 кг (C₁₂-C₁₈)-алкилдиметилбетаина и до 100 кг калия пероксомоносульфата, получая состав при следующем соотношении компонентов, мас.%:

В полученный состав дополнительно вводят азокраситель - амарант в конечной концентрации 1,0×10^-2 мас.%, получая состав 18.

Пример 19.

К 3,0 кг сульфаминовой кислоты добавляют 12,0 кг линейного алкилбензолсульфоната натрия, 2,0 кг смеси бикарбоната натрия и карбоната калия, взятых в массовом соотношении, равном 1:3, соответственно, 0,5 кг пара-толуолсульфоната, 2,0 кг метилпирувата, 0,5 кг натрия хлорида, 1,0 кг резорцина, 3,0 кг (C₁₂-C₁₈) -алкилдиметилбетаина и до 100 кг калия пероксомоносульфата, получая состав при следующем соотношении компонентов, мас.%:

В полученный состав дополнительно вводят азокраситель - кислотный красный 18 в конечной концентрации 1,0×10^-4 мас.%, получая состав 19.

Пример 20.

К 6,0 кг сульфаминовой кислоты добавляют 18,0 кг линейного алкилбензолсульфоната натрия, 7,0 кг смеси бикарбоната натрия и карбоната калия, взятых в массовом соотношении, равном 1:1, соответственно, 2,0 кг пара-толуолсульфоната, 7,0 кг метилпирувата, 4,0 кг натрия хлорида, 3,0 кг резорцина, 9,0 кг (C₁₂-C₁₈)-алкилдиметилбетаина и до 100 кг калия пероксомоносульфата, получая состав при следующем соотношении компонентов, мас.%:

В полученный состав дополнительно вводят азокраситель - кислотный красный 18 в конечной концентрации 1,0×10^-2 мас.%, получая состав 20.

Пример 21.

Испытание спороцидной активности заявляемого средства «Дезакар» проводили следующим образом.

Спороцидное действие составов 1-20, полученных согласно примерам 1-20, в сравнении с прототипом, определяли суспензионным методом на спорах авирулентного вакцинного сибиреязвенного штамма «55-ВНИИВВиМ» бацилл антрацис ( Bacillus anthracis }. Содержание жизнеспособных спор определяли методом предельных разведении, высевая культуру на МПА. В опытах использовали культуру с исходной концентрацией колониеобразующих единиц (КОЕ), доведенной до 10⁹КОЕ/см³, и серии ее десятикратных разведении.

К внесенным в объемах по 50 мкл в 10 мл пробирки образцам спор в разведениях от 1:1 до 1:10⁷ добавляли по 250 мкл составов 1-16 в концентрации 1, 2, 3, 4 или 5%% или физраствор, перемешивали и выдерживали при комнатной температуре в течение 15, 30, 60 или 90 минут, отбирали по 100 мкл суспензии и переносили в пробирки с 1200 мкл раствора нейтрализатора, перемешивали 15 минут, после чего высевали по 200 мкл в пробирки с мясопептонным агаром (МПА), которые помещали в термостат при 37°С. Результаты учитывали через 24 часа, визуально отмечая наличие или отсутствие роста вегетативных форм и подсчитывая количество колоний.

В связи с тем, что испытываемые составы действуют как окислители, в качестве нейтрализатора для фиксации времени обработки использовали тиосульфат натрия, действующий как восстановитель, в концентрации 0,25% с добавкой 0,02% детергента Тритон Х-100.

Для контроля эффектов нейтрализатора проверяли его действие на споры, для чего по 50 мкл каждого их разведения смешивали с 450 мкл раствора тиосульфата натрия (0,1; 0,25; 0,5 или 1,0%, с добавкой во всех случаях 0,02% Тритон Х-100), выдерживали 15 мин при комнатной температуре, высевали по 100 мкл в пробирки с МПА, оставляли при температуре 37°С в течение 24 часов, после чего проводили учет визуально.

Характер сплошного роста и число колоний выросших вегетативных форм бацилл в исследованных сериях разведений при их обработке нейтрализатором или физиологическим раствором практически совпадали, что означало отсутствие ингибирования тиосульфатом натрия в проверенных концентрациях и возможность его корректного использования для инактивации остатков испытуемых составов в целях фиксации времени обработки.

Результаты

1. Применение заявляемого средства «Дезакар» (составы 1-20) в концентрациях 2%, при нейтральном значении рН рабочего раствора в течение 15 мин приводило к прекращению роста высеянных на МПА проб, взятых из всех разведений, что равносильно гарантированному снижению концентрации спор на 61g. При обработке заявляемым средством в концентрации 1% прекращался рост вегетативных форм в высевах из разведений 1:100, что означало снижение концентрации спор на 41g.

2. Обработка образцов спор заявляемым средством «Дезакар» (составы 1-20) в концентрации 3% при нейтральном значении рН рабочего раствора в течение 30 минут вызывало прекращение роста высеянных на МПА проб, взятых из разведений 1:10, что равносильно снижению концентрации спор на 51g.

3. Обработка образцов спор средством-прототипом в концентрации 3% в течение 60 мин вызывала прекращение роста в высевах из разведений 1:100, что означало снижение концентрации спор на 41g.

Вывод

Заявленное средство «Дезакар» в сравнении с прототипом проявляет более высокую удельную спороцидную активность в отношении суррогатной споровой культуры, при этом оно действует в 2 раза быстрее и в отличие от прототипа эффективен при нейтральном значении рН, что означает, кроме того, ослабление коррозийной активности препарата.

Пример 22.

Испытание акарицидной активности заявляемого средства «Дезакар» проводили следующим образом.

Акарицидное действие составов 1-20, полученных согласно примерам 1-20, и состава-прототипа определяли на клещах Ornithodorus papillipes - представителе сем. Argasidae, отр. Parasitiformes, - переносящем спирохеты рода Borrelia, возбудителей клещевых спирохетозов.

Круг фильтровальной бумаги диаметром 10 см (на 1 см больше диаметра стандартной чашки Петри), площадью 80 см² с краями помещали на дно горизонтально расположенной чашки Петри, загнув края круга на стенки чашки, переносили на него 10 активных нетравмированных самок О. papillipes, голодавших 5-6 месяцев, орошали из пипетки раствором препарата из расчета 1,2 мл на чашку. В контрольном варианте на круги такой же бумаги наносили воду. Продолжительность контакта клещей с орошенной бумагой 30 мин.

Клещей, пытавшихся выползти за пределы круга, кисточкой возвращали на бумагу. Контакт с каждой концентрацией препаратов проводили в 3-х повторностях по 10 клещей в каждой при комнатной температуре.

Исследовали действие рабочих растворов, начиная с разведения 1:16. В контроле выполняли 5 повторностей по 10 клещей на отдельном столе с использованием незагрязненных инструментов.

После контакта клещей кисточкой переносили в пробирки дифференцированной влажности с ватным тампоном, смоченным водой, слоем песка и полоской фильтровальной бумаги, приготовленным по методике, изложенной в «Методических указаниях по организации и проведению противоклещевых мероприятий…», от 02.10.87 N 28-6/33, утв. ГУВ МСХ РФ, по 10 особей в пробирку, размещали горизонтально при комнатной температуре и естественной освещенности. Учет проводили на 5 и 15 день, к живым относили особей, способных к передвижению, к мертвым - неподвижных, не реагирующих на тепло руки.

Результаты

Среднесмертельные концентрации СК₅₀ (соответствует гибели 50% клещей) и СК₉₅ (соответствует гибели 95% клещей) определяли по количеству погибших клещей согласно методике, изложенной в части 6 Руководства Р 4.2. 2643-10 «Методы лабораторных исследований и испытаний дезинфекционных средств для оценки их эффективности и безопасности». В результате использования заявляемого средства в сравнении с прототипом были получены следующие результаты:

Вывод

Заявляемое средство «Дезакар» в сравнении с прототипом обладает более высокой акарицидной активностью, которая превосходит активность прототипа в 1,5-3,5 раза и при этом имеет место при нейтральном рН, то есть при сниженной коррозийной активности.

Пример 23.

Испытание детоксицирующей активности заявляемого средства «Дезакар» в отношении гексахлорбензола (ГХБ) проводили следующим образом.

ГХБ (CAS №118-74-1), применявшийся ранее для борьбы с членистоногими вредителями и протравливания семян, относится к стойким органическим загрязнителям, внесенным в список Стокгольмской Конвенции ООН. В настоящее время он образуется непреднамеренно, в ходе производства другой химической продукции. Будучи выделенным в окружающую среду, аккумулируется в пищевых цепях.

В целях предотвращения загрязнения анализируемых проб органическими гидрофобными примесями, в опытах использовали дистиллированную воду, очищенную н-гексаном посредством встряхивания в делительной воронке. Для осушения экстрактов пользовались безводным сульфатом натрия, получая его прокаливанием в фарфоровой чашке в муфельной печи при температуре 400°С в течение 8 ч. Воздух, используемый для упаривания экстрактов, очищали, пропуская через фильтр с активным углем.

Детоксицирующее действие составов 1-20 и прототипа оценивали по результатам анализа обработанных ими образцов почвы, загрязненных ГХБ. В опытах использовали стандартные образцы почвы «Серозем карбонатный ССК-3 ГСО 2506-83» (НИИ прикладной физики ИГУ) и стандартный образец ГХБ с содержанием ГХБ 99,8% (ГСО 7495-98).

Количественное определение ГХБ выполняли методом газожидкостной хроматографии на хроматографе «Кристаллюкс-4000М» с капиллярной колонкой ZB-5 длиной 30 м и внутренним диаметром 0,35 мм, в соответствии с ГОСТ Р 53217-2008. «Качество почвы. Определение содержания хлорорганических пестицидов и полихлорированных бифенилов. Газохроматографический метод с электронозахватным детектором», с уточнением оптимальных условий экстрагирования остатков ГХБ из почвы и параметров анализа согласно работе О.А.Дубровина, Д.Н.Муратов, Ю.А.Стекольников, Б.А.Сотников «Определение остаточных количеств гексахлорбензола в почве методом газожидкостной хроматографии». Вестник ТГТУ. 2009. Том 15, стр.682-687.

Образец почвы дополнительно высушивали безводным сульфатом натрия, замораживали, измельчали в фарфоровой ступке. Представительные навески почвы массой по 10 г вносили в конические 100 мл колбы (маркированные №№1-22), добавляли в каждую по 100 мкг ГХБ, растворенного в 0,5 см³ о-ксилола, закрывали пришлифованными пробками, перемешивали на механическом встряхивателе 10 минут.

Затем в колбы №№1-22 вносили по 2 см³ водного раствора детоксицирующего препарата (приготовленного на очищенной н-гексаном воде) в концентрации 3%:

№1 - состав 1, №2 - состав 2; №3 - состав 3; №4 - состав 4; №5 - состав 5; №6 - состав 6; №7 - состав 7; №8 - состав 8; №9 - состав 9; №10 - состав 10; №11 - состав 11; №12 - состав 12; №13 - состав 13; №14 - состав 14; №15 - состав 15; №16 - состав 16; №17 - состав 17; №18 - состав 18; №19 - состав 19; №20 - состав 20; №21 - состав - прототип. В колбу №22 вносили 2 см³ дистиллированной воды.

Колбы перемешивали на встряхивателе 5 минут, выдерживали при комнатной температуре 1 час, приливали в каждую колбу по 50 см³ бензола, перемешивали на встряхивателе 30 мин, центрифугировали 5 мин для осаждения почвы. Надосадочный экстракт сливали в стакан, пропускали через слой безводного сульфата натрия и переносили в колбу роторного испарителя, использованный при этом слой сульфата натрия дважды промывали петролейным эфиром, порциями по 10 см³, объединяя их затем с экстрактом.

Полученный таким образом экстракт упаривали до объема 2-3 см³, переносили в градуированную пробирку на 5 см³, упаривали до 1 см³, брали микрошприцем аликвоту 1 мм³ и вносили ее в испаритель хроматографа для количественного определения ГХБ.

Для оценки общей токсичности продуктов, оставшихся в образцах почвы после ее обработки детоксицирующими препаратами, повторяли опыт с другими образцами почвы, обрабатывая их по схеме, описанной выше (до стадии добавления бензола). Готовили водные вытяжки, приливая по 50 мл дистиллированной воды в каждую колбу, взбалтывали на механическом встряхивателе 5 мин, оставляли для экстракции на 24 часа.

Водные экстракты сливали в стаканы, фильтровали через обеззоленные бумажные фильтры типа ФОБ (красная, белая ленты) и тестировали на токсичность, определяя степень ингибирования (при экспозиции 30 мин) биолюминесценции тест-культуры люминесцирующих бактерий марки «Эколюм» с помощью люминометра «Биотокс-10» согласно Методическим рекомендациям МР 11-1/134-09 «Определение общей токсичности почв по интенсивности биолюминесценции бактерий».

Тест-культуру реконструировали, добавляя во вскрытый флакон лиофилизованного препарата 10 мл охлажденной до 4°С стерилизованной дистиллированной воды, рН в пределах 7,0-7,2, оставляя на 30 мин в холодильнике при +4°С и доведя затем температуру до комнатной.

Оценку токсичности пробы проводили по относительному различию в интенсивности биолюминесценции контрольной и опытной проб и вычислению индекса токсичности G=100%*(I_o-I)/I, где I_o, I - интенсивность биолюминесценции, соответственно, в контроле и опыте. Индекс G представляет собой зависимость отношения потери интенсивности свечения пробы к оставшейся интенсивности свечения пробы.

Результаты

При количественном определении ГХБ методом газожидкостной хроматографии установлено, что обработка заявленным средством (составами 1-16) приводит к снижению содержания ГХБ.

Оценка общей токсичности почвы после обработки детоксикантами посредством измерения биолюминесценции тест-культуры, смешанной с водной вытяжкой, показала снижение индекса токсичности в результате обработки.

Вывод

Заявляемое средство «Дезакар» снижает содержание ГХБ (на 99,5%) и индекса токсичности (с 78 до 10%).

Заявителем были также проведены исследования вирулицидной активности заявленного средства «Дезакар» по истечении хранении его два года по отношению к вирусу ящура, вирусу болезни Гамборо, вирусу африканской чумы, которые показали, что заявленное средство «Дезакар» при контакте с вышеуказанными вирусами в течение одной минуты обеспечивают полную их гибель в концентрации 0,25%, в то время как известный состав (прототип) при хранении два года аналогичный эффект проявлял лишь при 2-4,0%-ной концентрации раствора, т.е. вирулицидный эффект заявляемого состава в 4-8 раз выше вирулицидного эффекта прототипа.

Таким образом, заявляемое средство для дезинфекции объектов ветеринарного надзора значительно превосходит известное средство по спороцидной, вирулицидной, акарицидной и детоксицирующей активностям.