СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВОДОРАСТВОРИМОГО ЛИОФИЛИЗАТА 4-(3-ОКСО-3-ЭТОКСИПРОПАНОИЛ)АМИНО)БЕНЗОЙНОЙ КИСЛОТЫ, ОБЛАДАЮЩЕЙ АНТИИШЕМИЧЕСКОЙ И АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТЬЮ

Предлагаемое изобретение относится к медицине и фармацевтической промышленности, а именно к водорастворимым препаратам и композициям, содержащим химические соединения кислотной природы, и к способам получения их водорастворимых лиофилизатов.

Известны вещества из ряда производных малоновой кислоты, которые обладают кардиостимулирующими свойствами [см., например, а.с. 1780293 СССР, МКИ С07С 233/54, A61K 31/16]. Синтезированное в СПХФА соединение - 4-((3-оксо-3-этоксипропаноил)амино)бензойная кислота (далее ЭПАБК) относится к ряду производных малоновой кислоты [Патент №2545833 РФ].

Проведенные исследования показали, что это соединение как индивидуально, так и в составе фармацевтической композиции проявляет в эксперименте антиишемическую и антиоксидантную активности.

Антиишемический эффект ЭПАБК и фармацевтической композиции на ее основе проявляется в виде положительного действия на систолический размер предсердия и левого желудочка, отсутствия гипертрофии миокарда, улучшения кровотока в легочной артерии. На фоне введения ЭПАБК не были обнаружены такие явления, как аневризма, синергия, акинезия, отсутствовало тромбообразование.

На фоне введения ЭПАБК наблюдали ускорение процессов репарации миокарда и уменьшение зоны некроза, повышение времени работоспособности, улучшение сократительной активности миокарда.

Значения антиоксидантной активности тестируемой субстанции ЭПАБК и фармкомпозиции на ее основе позволяет отнести это соединение к веществам с умеренной антиоксидантной активностью.

В результате изучения острой токсичности при внутрибрюшинном и пероральном введении установлено, что тестируемая фармацевтическая субстанция может быть отнесена к малотоксичным и нетоксичным веществам.

ЭПАБК образует водорастворимые соли с аммиаком и сильными щелочами. Водные растворы натриевой или аммониевой солей ЭПАБК имеют pH более 10 и вследствие щелочной реакции непригодны для парентерального введения, т.к. не отвечают требованию изоионичности.

Кроме того, щелочная ионизированная форма ЭПАБК нестабильна, молекула в водных щелочных растворах подвергается гидролизу и расщепляется до солей исходных малоновой и бензойной кислот.

При подкислении водных щелочных растворов до pH менее 8,5-9,0 ЭПАБК переходит в нерастворимую кислую форму и выпадает в осадок.

Известен способ получения препарата на основе 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]-аммоний-Д-глюцитола, который заключается в следующем: 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]-аммоний-Д-глюцитол и воду для инъекций перемешивают до полного растворения компонентов, затем добавляют N-метилглюкамин до достижения pH 7,6 и воду для инъекций до получения заданного объема. Полученный раствор фильтруют через стерилизующий фильтр, разливают в стерильные емкости объемом 1, 2 и 5 мл [Пат. 2182004, МПК A61K 31/7008, A61K 31/435. Лекарственный препарат для парентерального применения]. Задачей изобретения 2182004 являлось повышение биологической активности лекарственного препарата для парентерального применения при одновременном повышении стабильности лекарственной формы в процессе производства и хранения.

Задачей предлагаемого изобретения является создание способа получения водорастворимого лиофилизата ЭПАБК с pH 6,5-7,5 для получения инъекционного раствора, отвечающего по своим физико-химическим свойствам требованиям фармакопеи.

Задача решается созданием способа получения водорастворимого лиофилизата, включающего получение совместного раствора активной субстанции и соединения, содержащего гидроксильные и аминогруппы (аминоспирт), причем активная субстанция представляет собой 4-((3-оксо-3-этоксипропаноил)амино)бензойную кислоту (ЭПАБК), обладающую антиишемической и антиоксидантной активностью, а аминоспирт выбран из группы N-метилглюкамин или трис(гидроксиметил)аминометан, названные субстанцию и аминоспирт, взятые в мольном соотношении от 1:1 до 1:10, растворяют в воде, прибавляют к раствору кислотный агент до pH 6,8-7,5, нейтральный раствор фильтруют, замораживают и сушат сублимационным методом.

Задача решается также тем, что в качестве кислотного агента используют водный раствор фосфата натрия однозамещенного.

Задача решается также тем, что в качестве кислотного агента используют янтарную кислоту кристаллическую.

В процессе исследований было экспериментально определено, что ЭПАБК нерастворима в воде, однако растворяется в водных растворах аминоспиртов, т.е. соединений, содержащих гидроксильные и аминогруппы, таких как трис(гидроксиметил)аминометан, N-метилглюкамин. Эти растворы прозрачны и имеют pH более 9,5.

Неожиданно было установлено, что при последующем добавлении кислотного агента к раствору, содержащему ЭПАБК и аминоспирт, pH снижается, причем раствор остается прозрачным при снижении pH до 6,5. В то же время при нейтрализации щелочного раствора ЭПАБК без аминоспирта выпадает осадок при снижении pH ниже 9,0. Таким образом, оказалось, что нейтрализация щелочного раствора ЭПАБК в присутствии аминоспиртов не вызывает выпадения ЭПАБК в осадок.

Изобретение проиллюстрировано четырьмя графиками ИК-спектров.

Методом ИК-спектроскопии было установлено, что аминоспирты проявляют свойство стабилизировать ионизированное состояние карбоксильной группы ЭПАБК при нейтральных значениях pH (фиг. 1, 2, 3, 4).

Фиг. 1 - ИК-спектр ЭПАБК, переосажденной кислотой хлористоводородной из щелочного раствора (pH 1,1).

Фиг. 2 - ИК-спектр натриевой соли ЭПАБК (pH 11,0).

Фиг. 3 - ИК-спектр комплекса ЭПАБК с N-метилглюкамином (pH 7,2).

Фиг. 4 - ИК-спектр комплекса ЭПАБК с трис(гидроксиметил)аминометаном (pH 7,4).

Максимум поглощения неионизированной карбоксильной группы находится в области 1680-1700 см^-1, а ионизированной (карбоксилат-иона) - 1620-1590 см^-1. Из представленных ИК- спектров следует, что ЭПАБК в кислотной форме имеет максимум поглощения при 1670-1680 см^-1, а нейтральные комплексы ЭПАБК с N-метилглюкамином и трис(гидроксиметил)аминометаном при 1600-1610 см^-1, так же как и щелочная натриевая соль ЭПАБК (фиг. 1, 2, 3, 4).

Поскольку при ионизации карбоксильной группы снижается поглощение при 1670 см^-1 и увеличивается при 1600-1610 см^-1, то наглядной характеристикой степени ионизации карбоксильной группы является отношение пропусканий T₁₆₀₅/T₁₆₇₀ (табл. 1).

Как следует из табл. 1, комплексы ЭПАБК с N-метилглюкамином и трис(гидроксиметил)аминометаном содержат значительную долю ионизированной группы при нейтральных значениях pH.

Таким образом, аминоспирты в экспериментально найденных концентрациях стабилизируют дисперсность ЭПАБК на молекулярном или коллоидном уровне при нейтральных значениях pH.

Полученный нейтральный раствор легко фильтруется через мембранные фильтры с размером пор 0,45 и 0,22 мкм. Затем раствор дозируют во флаконы, замораживают и высушивают сублимационным методом.

Полученный продукт представляет собой пористую массу или порошок, легко растворимый в воде. Водный раствор полученного препарата имеет pH 6,5-7,5. Препарат легко растворим в изотоническом растворе хлорида натрия, 5% растворе глюкозы.

Сущность заявляемого изобретения - способа получения нейтрального водорастворимого лиофилизата ЭПАБК - заключается в совместном растворении в воде аминоспирта и ЭПАБК, нейтрализации полученного прозрачного раствора кислотным агентом до pH 6,5-7,8; фильтрации раствора и сублимационной сушке. Существенным является также мольное соотношение аминоспирта и ЭПАБК (M_AC:M_ЭПАБК), которое должно быть не менее 1,2:1. При меньшем относительном количестве аминоспирта растворение ЭПАБК происходит медленно и не полностью.

В качестве кислотного агента могут быть использованы минеральные кислоты и их кислые соли, а также органические кислоты.

В раствор ЭПАБК могут быть добавлены, но не обязательно, целевые добавки, снижающие гигроскопичность, улучшающие консистенцию, оптимизирующие процесс лиофильной сушки, например маннит, глюкоза, поливинилпирролидон и другие разрешенные к инъекционному введению ингредиенты.

Водные растворы лиофилизата, полученного по заявляемому способу, стабильны и пригодны для парентерального введения в течение до 12 ч и более.

Техническим результатом заявляемого изобретения является способ, который позволяет получать водорастворимые стабильные нейтральные лиофилизаты ЭПАБК, отвечающие технологическим требованиям препаратов для парентерального введения.

Изобретение характеризуется следующими примерами (табл. 2-4).

После анализа образцов в укупоренных пенициллиновых флаконах, заложенных на хранение при температуре 20±2°С и относительной влажности 60±5%, установлено, что препарат остается стабильным спустя 12 мес, содержание воды увеличивается не более чем на 2% (табл.4).

Примеры осуществления способа получения водорастворимого

лиофилизата ЭПАБК

Пример 1. Получение водорастворимого лиофилизата ЭПАБК 7% с N-метилглюкамином (M_АС:M_ЭПАБК=1,5:1 моль/моль) с нейтрализацией раствором натрия дигидрофосфата 2 М.

В стакан вместимостью 2 л вносят 70,00 г ЭПАБК, 81,60 г N-метилглюкамина, порциями приливают воду для инъекций, доводят до 1000 мл, тщательно перемешивая при нагревании до 60-70°С на магнитной мешалке.

Полученный раствор охлаждают, фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм. К фильтрату порциями добавляют при перемешивании 42,0 мл раствора натрия дигидрофосфата 2 М, доводя до значения pH 6,8-7,0.

Полученный прозрачный нейтральный раствор фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,22 мкм.

Раствор дозируют во флаконы, замораживают и высушивают сублимационным методом.

Полученный продукт представляет собой белую пористую массу, легко растворимую в воде. Водный раствор полученного лиофилизата имеет pH 6,7-6,9.

Выход составляет 153 г (94,5% по массе). Свойства полученных образцов указаны в табл. 3 и табл. 4, вариант 4.

Пример 2. Получение водорастворимого препарата ЭПАБК 5% с трис(гидроксиметил)аминометаном (M_АС:M_ЭПАБК=10:1 моль/моль) с нейтрализацией кислотой янтарной.

В стакан вместимостью 1 л вносят 25,0 г ЭПАБК, 120,56 г N-метилглюкамина, 18,13 г D-маннита, порциями приливают воду для инъекций, доводят объем до 500 мл, тщательно перемешивая при нагревании до 60-70°С на погружной мешалке.

Полученный раствор охлаждают, фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм. К фильтрату порциями добавляют при перемешивании 1,76 г кислоты янтарной, доводя до значения pH 7,3-7,5.

Полученный прозрачный нейтральный раствор фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,22 мкм.

Раствор дозируют во флаконы, замораживают и высушивают сублимационным методом.

Полученный продукт представляет собой белую пористую массу, легко растворимую в воде. Водный раствор полученного лиофилизата имеет pH 7,1-7,3.

Выход составляет 153,5 г (92,8% по массе). Свойства полученных образцов препарата указаны в табл. 3 и табл. 4, вариант 7.