КОМБИНИРОВАННОЕ АППЛИКАЦИОННОЕ ЛЕКАРСТВЕННОЕ ФИТОСРЕДСТВО

Изобретение относится к области химико-фармацевтической промышленности, в частности к производству комбинированных лекарственных форм в виде эластичных пластин (лекарственных пленок) с фитосубстанциями для оказания антимикробного и противовирусного действия в медицинской практике.

В фармацевтической технологии известны композиции аппликационных лекарственных средств в виде наружных растворов, мазей и лекарственных пленок [1-8, 14, 16-18]. Однако изготовление их осуществляется с использованием спирта, вазелина, желатина, агар-агара, метилцеллюлозы, Na-карбоксиметилцеллюлозы, коллагена, альгината натрия. Эти основы не обладают широким спектром лечебного действия, что сокращает область их применения.

Наиболее близким к изобретению является ранозаживляющее лекарственное средство «Санглирен», содержащее сангвиритрин, масло расторопши, глицерин и коллаген (прототип) [10].

Недостатком известного состава лекарственной пленки является отсутствие противовирусного действия, необходимость эмульгирования масляной фазы, ограниченный срок хранения 2%-ного уксуснокислого раствора коллагена [9], ограниченная область применения лекарственного средства и низкая эффективность лечебного воздействия.

Целью изобретения является создание нового комбинированного аппликационного лекарственного фитосредства с широким спектром фармакологического действия.

Поставленная цель достигается тем, что в процессе разработки в состав исходной массы для лекарственных пленок вводят в качестве лекарственных веществ - алпизарин, обладающий противовирусной активностью, и сангвиритрин с противомикробной активностью, а в качестве пленкообразователя используют уксуснокислый раствор хитозана и дополнительно вводят вспомогательные вещества: диметилсульфоксид (растворитель и пенетратор) и глицерин (пластификатор) при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Необходимость включения в состав средства двух лекарственных веществ - алпизарин и сангвиритрин связано с необходимостью создания комбинированного лечебного действия - противовирусного и антимикробного в одной лекарственной форме. Указанные лекарственные вещества не растворимы в воде и мало растворимы в спирте этиловом, но легко растворимы в диметилсульфоксиде (ДМСО), поэтому он выбран в качестве растворителя активных субстанций. Кроме того, ДМСО является активным пенетратором, обеспечивая проникновение лекарственных веществ из области аппликации в глубьлежащие ткани.

Предлагаемое комбинированное фитосредство является аппликационной лекарственной формой в виде лекарственной пленки, поэтому в качестве формообразователя (basis) выбран природный полимер - пленкообразователь хитозан, который легко растворим в кислоте уксусной с образованием прозрачных вязких растворов, при высыхании которых получается прочная пленка.

Для эластичности лекарственной пленки в состав фитосредства введен глицерин медицинский.

Сравнение предлагаемого состава с другими известными составами [11-13, 15] указывает на соответствие критерию изобретательский уровень.

Заявляемая композиция реализуется следующим образом:

В асептических условиях в стерильную емкость на 50 мл помещают 0,9 г (мас.%) хитозана (ТУ 9289-003-49857769-2003 - «Хитозан крабовый») и заливают 2%-ным раствором кислоты уксусной (изготовленный из кислоты уксусной ледяной - ГОСТ 61-75) комнатной температуры в количестве 27,0 г. Выдерживают 2-3 ч до растворения хитозана и образования прозрачного раствора. Полученный раствор фильтруют.

В стерильную ступку отвешивают 0,056 г порошка сангвиритрина (ФС 42-244-98) растворяют в 1,73 диметилсульфоксида (ДМСО) - (ВФС 42-1166-81). К полученному раствору добавляют 0,056 г порошка алпизарина (ФС 42-2522-88) и перемешивают до получения однородного раствора. К нему добавляют 28,3 г приготовленного раствора хитозана, гомогенизируют, добавляют 0,849 г глицерина (ФС 42-2202-84) и снова гомогенизируют. Выдерживают 30 мин для удаления воздуха и полученную массу выливают в стерильную форму, размером 100×100 мм, толщина слоя пленочной массы при этом должна составлять 5 мм. Сушат в асептических условиях при комнатной температуре до остаточной влажности 10%.

После высушивания полученные пластины толщиной 0,8±0,3 мм дозируют на необходимые размеры и упаковывают в полиэтилен.

Полученное фитосредство содержит:

сангвиритрин, обеспечивающий антимикробный эффект;

алпизарин, оказывающий противовирусное действие;

диметилсульфоксид - растворитель фитосубстанций и пенетратор;

хитозан, обладающий пленкообразующими свойствами и оказывающий антимикробное, ранозаживляющее и противовоспалительное действие; глицерин, обеспечивающий эластичность аппликационного средства.

Сравнение заявляемого объекта с прототипом позволяет сделать вывод, что в предложенном лекарственном средстве содержатся новые компоненты - алпизарин и хитозан, чем усиливаются его антимикробные и противовирусные свойства. Количественное соотношение компонентов в заявляемом средстве зависит от области применения, а также необходимой величины антимикробной и противовирусной активности.

Исследования, проведенные при создании нового комбинированного аппликационного лекарственного фитосредства

1. Исследование совместимости лекарственных ингредиентов с использованием спектрофотометрии

Для анализа использовали 0,0017%-ные растворы сангвиритрина и алпизарина в ДМСО.

На первом этапе установили отсутствие межмолекулярного взаимодействия отдельно для каждого вещества. Для этого с помощью построения зависимости оптической плотности от концентрации раствора в ДМСО, определяли пропорционально ли изменению концентрации меняется оптическая плотность раствора вещества (табл. 1).

Как показывают данные табл. 1, зависимость оптической плотности от концентрации диметилсульфоксидных растворов сангвиритрина и алпизарина имеет пропорциональный характер, следовательно, межмолекулярного взаимодействия внутри отдельно рассматриваемых веществ не происходит. Принимая во внимание отсутствие взаимодействий внутри каждого вещества в исследуемом диапазоне концентраций, определяли возможное взаимодействие между сангвиритрином и алпизарином.

Экспериментальное исследование осуществляли в два этапа:

1 этап - определение индивидуальных спектров сангвиритрина и алпизарина в растворе ДМСО (концентрация каждого вещества 25%) (рис. 1).

2 этап - определение спектров смеси сангвиритрина и алпизарина, растворенных в ДМСО в той же концентрации (рис. 2).

При сопоставлении спектров отдельных веществ со спектром смеси фитосубстанций видно, что взаимодействие веществ в растворе ДМСО не наблюдается, так как пики, характерные для отдельного вещества, регистрируются и в смеси.

Таким образом, полученные результаты позволяют прогнозировать рациональное сочетание двух фитосубстанций (алпизарин и сангвиритрин) в одной лекарственной форме, неизменность их индивидуального фармакологического эффекта для оказания комбинированного (антимикробного и противовирусного) действия.

2. Исследование совместимости выбранных фитосубстанций с помощью ТСХ

Для проведения эксперимента использованы алюминиевые пластинки «Силуфол UV-254", 20×20 см» и стеклянные пластинки с целлюлозой 10×20 см (Merck, Германия). На пластинки наносили растворы индивидуальных «свидетелей» - Государственные стандартные образцы (ГСО) «сангвиритрин» и «алпизарин» и растворы, содержащие оба компонента. Разделение осуществляли в разных системах: 1 система: эфир этиловый - эфир петролейный - метанол в соотношении 35:15:3; 2 система: 15%-ный раствор кислоты уксусной. Хроматографирование осуществляли восходящим способом.

Результаты эксперимента показали, что на хроматограммах зоны адсорбции испытуемых растворов соответствуют зонам адсорбции растворов ГСО и по цвету, и по показателям Rf, что свидетельствует об отсутствии взаимодействия между лекарственными компонентами лекарственной формы.

3. Исследование высвобождения фитосубстанций через полупроницаемую мембрану из комбинированного аппликационного лекарственного средства

При проведении исследования методом диализа через полупроницаемую мембрану с последующим определением оптической плотности диализных растворов алпизарина и сангвиритрина методом спектрофотомерии получили следующие данные:

Для стандартного раствора смеси алпизарина и сангвиритрина получили следующие данные:

Таким образом, A_st для серии растворов высвобождения пленок с алпизарином составляет 1,636, a C_st=0,0548 мг/мл=0,0548 г/л. Для серии растворов высвобождения пленок с сангвиритрином составляет 2,724, а C_st=0,0548 мг/мл=0,0548 г/л. Для серии растворов высвобождения пленок с сангвиритрином и алпизарином составляет:

1) для алпизарина A_st=1,196, а C_st=0,0548 мг/мл=0,0548 г/л.

2) для сангвиритрина A_st=2,452, а C_st=0,0548 мг/мл=0,0548 г/л.

Изучили высвобождение фитосубстанций через полупроницаемую мембрану из индивидуальных лекарственных фитопленок и при их совместном присутствии в лекарственной форме. По полученным результатам строили графики высвобождения (рис. 3-7).

Результаты высвобождения показывают, что максимальная концентрация сангвиритрина (0,0547±0,0001 мг/мл) в диализной жидкости создается через 90 мин, что составляет 99,78% сангвиритрина от введенного в лекарственную форму.

Результаты высвобождения алпизарина из лекарственных фитопленок с ним представлены на рис. 5-6, из которых видно, что за 180 мин высвобождается 0,0104±0,0001 мг/мл введенного вещества.

При этом высвобождение начинается с 30 минуты и продолжает нарастать, что является положительным для пролонгированной лекарственной формы с противовирусным действием. Учитывая полученные результаты, можно прогнозировать 2-этапное лечебное действие разработанной аппликационной лекарственной формы: на первом этапе - антимикробное, на втором - противовирусное.

Из полученных результатов видно, что высвобождение через полупроницаемую мембрану сангвиритрина из комбинированной лекарственной фитопленки идет медленнее, чем алпизарина; к 180 минуте эксперимента сангвиритрина в диализную жидкость высвободилось 8,28% (0,0045±0,0001), а алпизарина - 16,05% (0,0088±0,0002), причем концентрация обеих фитосубстанций в диализной жидкости продолжает нарастать, свидетельствуя о продолжающемся высвобождении активных субстанций, что будет обеспечивать пролонгированное действие лекарственной формы.

4. Исследование в опыте in vitro активности комбинированного аппликационного лекарственного средства с помощью биотест-системы

Исследования были проведены in vitro с использованием ферментной биотест-системы на основе индуцибельной NO-синтазы (iNOS). Известно, что индуцибельная NO-синтаза подавляет активность инфицирующего агента путем увеличения синтеза активного радикала NO.

В опыте оценивали влияние диметилсульфоксидных растворов сангвиритрина и алпизарина до и после их включения в лекарственные пленки с хитозаном на ферментативную активность iNOS. Полученные результаты представлены в табл. 2.

Из полученных результатов видно, что исходные диметилсульфоксидные растворы сангвиритрина и алпизарина активируют iNOS-реакцию in vitro в 1,6 и 1,4 раза соответственно. При исследовании антимикробной и противовирусной активности комбинированных лекарственных пленок с сангвивитрином и алпизарином на основе хитозана в экспериментах in vitro было установлено увеличение ферментативной iNOS-реакции в 1,4 и 1,2 раза по сравнению с контролем, что свидетельствует об их эффективной фармакологической активности. Значительное увеличение активности iNOS наблюдалось в присутствии раствора пленок на хитозане, содержащих как сангвиритрин, так и алпизарин. Ферментативная активность iNOS при этом возрастала в 1,7 раза по сравнению с контролем.

Следовательно, такая комбинация лекарственных и вспомогательных веществ не уменьшает фармакологическую активность исходных фитосубстанций и является рациональной для внедрения в медицинскую практику.

5. Исследование стерильности и антимикробной активности аппликационного лекарственного средства

Подтверждение активности фитопленки получено и при проведении микробиологических исследований.

Исследование на стерильность и антимикробную активность определяли на питательных средах в отношении тест-штаммов микроорганизмов Staphylococcus aureus ATCC 65380, Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeroginosa ATCC 9027, Bacillus cereus ATCC 10702, Candida albicans ATCC 885-653 по методике ГФ XII изд. часть 1, «Биологические методы контроля». В эксперименте рост штаммов тест-микроорганизмов отсутствовал, из чего следует вывод, что лекарственная форма соответствует требованиям стерильности.

При исследовании антимикробной активности установлено, что по сравнению с контролем, на питательных средах с исследуемой лекарственной формой не наблюдается образование колоний на чашках, что свидетельствует о наличии антимикробного действия у заявляемого фитосредства.

Таким образом, заявляемое аппликационное лекарственное фитосредство обладает комбинированным фармакологическим действием, свойственным индивидуальным фитосубстанциям, входящим в его состав, и предлагается для использования в дерматологии, гинекологии, оториноларингологии, хирургии путем наложения (аппликации) на поверхность кожи или слизистой оболочки для оказания пролонгированного антимикробного и противовирусного действия.

Источники информации

1. Алпизарин. Интернет-ресурс http://www.rlsnet.ru/tn_index_id_11073.htm (дата обращения 1.07.2014 г.).

2. Алпизариновая мазь. Интернет-ресурс, http://itabletki.ru/alpisarin-ointment (дата обращения 10.07.2014 г.).

3. Вичканова С.А. Эффективность алпизарина при герпесвирусных заболеваниях у детей и взрослых. // Практическая фитотерапия. - 2000.- №1. - С. 34-39.

4. Вичканова С.А., Колхир В.К., Крутикова Н.М, Адгина В.В., Фатеева Т.В, Сокольская Т.А. Сангвиритрин - представитель нового поколения препаратов антимикробного действия // В кн.: «Химия, технология, медицина». Сб. науч. трудов, посвящ. 70-летию Всероссийского НИИ лекарственных и ароматических растений. - М. 2000. - С. 300-309.

5. Вичканова С.А., Крутикова Н.М. Сангвиритрин в лечении инфекционно-воспалительных заболеваний ЛОР-органов // Врач. - 2012. - №6. - С. 73-78.

6. Вичканова С.А., Крутикова Н.М. Эффективность Сангвиритрина при лечении инфекционно-воспалительных заболеваний ЛОР-органов // Русский медицинский журнал. - 2012 (а). - №9. - С. 480-484.

7. Вичканова С.А., Колхир В.К., Сокольская Т.А., Воскобойникова И.В., Быков В.А. Сангвиритрин // В кн.: «Лекарственные средства из растений». - М. 2009. - С. 246-261.

8. Государственный реестр лекарственных средств по состоянию на 23.06.2014 г. Интернет-ресурс

http://vandex.ru/vandsearch7k-213&clid-1985544&win=121&text=%D0%B3%D0%BE%D1%81%D1%83%D0%B4%D0%B0%D1%80%D1%81%D1%82%D0%B2%D0%B5%D0%BD%D0%BD%D1%8B%D0%B9+%D1%80%D0%B5%D0%B5%D1%81%D1%82%D1%80+%D0%BB%D0%B5%D0%BA%D0%B0%D1%80%D1%81%D1%82%D0%B2%D0%B5%D0%BD%D0%BD%D1%8B%D1%85+%D1%81%D1%80%D0%B5%D0%B4%D1%81%D1%82%D0%B2+2014 (дата обращения. 10.07.2014 г. ).

9. Коллаген. Интернет-ресурс.

http://makmedi.ru/index.php?option=com_content&view=article&id=9&Itemid=l0 (дата обращения 10.07.2014 г.).

10. Патент РФ №2143260, дата публ. 27.12.1999 г., санглирен.

11. Патент РФ №2143925, дата публ. 10.01.2000 г., ранозаживл покр с люцерной.

12. Патент РФ №2155071, дата публ. 27.08.2000 г., СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФИТОПЛЕНКИ.

13. Патент РФ №2179456, дата публ. 20.02.2002 г., СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АППЛИКАЦИОННОГО СРЕДСТВА рыб колл.

14. Патент РФ №2219955, дата публ. 27.12.2003 г., гидрокоолоид апп покр.

15. Патент РФ №2220724, дата публ. 10.01.2004 г., АНТИМИКРОБНОЕ И РАНОЗАЖИВЛЯЮЩЕЕ СРЕДСТВО "УЛЬТРАКОЛ" метилур Сангвиритрин.

16. Патент РФ №50416, дата публ. 20.01.2006 г.

17. РЛС. Энциклопедия взаимодействий лекарственных препаратов. - М.: ВЕДАНТА. - 2013. - 1360 с.

18. РЛС. Энциклопедия лекарств 2014. - М.: ВЕДАНТА. - 2013. - 1428 с.