Способ диагностики гипоксии плода в модели общей пренатальной гипоксической гипоксии у кроликов

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к диагностике гипоксии плода в пренатальном периоде развития у лабораторных животных.

Гипоксия плода является основной причиной перинатального поражения центральной нервной системы (ЦНС), перинатальной заболеваемости и смертности. Улучшение перинатальных исходов у новорожденных достигается ранним началом патогенетической терапии. Разработка информативных методов диагностики гипоксии плода у лабораторных животных является ключевой задачей в решении проблемы создания и оценки эффективности терапевтических стратегий при перинатальной гипоксии плода.

Известен способ диагностики гипоксии плода беременных крольчих (Schumacher В., Olson G.L., Saade G.R., Ou С.N., Sutton Т.E., Moise K.J.Jr, Fife С.E. Simulated airplane flight increases plasma lactate in fetal rabbits // Undersea Hyperb. Med. - 1999. - Vol. 26. - No. 2. - P. 67-73.) путем взятия образца крови плода под контролем ультразвукового исследования и определения в крови плода концентрации лактата. Концентрация лактата в крови плода выше 7-9 ммоль/л свидетельствует о гипоксии плода.

Недостатком известного способа является высокая сложность процедуры взятия образца крови плода у лабораторного животного.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому техническому результату является способ диагностики гипоксии плода при определении концентрации лактата в амниотической жидкости (Groppetti D., Martino P.A., Ravasio G., Bronzo V., Pecile A. Prognostic potential of amniotic fluid analysis at birth on canine neonatal outcomes // Vet. J. - 2015. - Vol. 206. - No. 3. - P. 423-425.), заключающийся в том, что во время родов у беременных собак стерильным шприцем забирают образец амниотической жидкости, в которой определяют концентрацию лактата. Концентрации лактата в амниотической жидкости выше 9-12 ммоль/л свидетельствуют о гипоксии плода.

Недостатком известного способа является низкая точность исследования.

Техническим результатом заявляемого способа является повышение точности исследования за счет использования корректирующих концентраций мочевины при определении концентрации лактата в амниотической жидкости.

Технический результат заявляемого способа достигается тем, что при моделировании общей пренатальной гипоксической гипоксии беременных крольчих породы Шиншилла на сроке 27-28 суток помещают в гипоксическую камеру, содержащую 10±2% кислорода и 90±2% азота на 60 минут, забивают и через 15 минут проводят гистерэктомию, вскрывают плодные мешки, забирают образцы амниотической жидкости, в которых определяют концентрацию лактата и мочевины с вычислением отношения лактат/мочевина и при величине отношения лактат/мочевина более 2,0-2,5 ммоль/л диагностируют гипоксию плода.

Способ осуществляют следующим образом.

Для иллюстрации заявляемого способа даны фигуры в виде таблиц 1, 2, 3, 4, 5.

На фиг. 1 представлены результаты исследования массы плода, массы плаценты и объема амниотической жидкости у крольчих на 27-28 сутки беременности, подвергшихся гипоксическому воздействую газовой смеси, содержащей 10±2% кислорода и 90±2% азота в течение 60 минут.

На фиг. 2 представлены результаты исследования концентрации лактата и мочевины в амниотической жидкости у крольчих на 27-28 сутки беременности, подвергшихся гипоксическому воздействую газовой смеси, содержащей 10±2% кислорода и 90±2% азота в течение 60 минут.

На фиг. 3 представлены результаты исследования отношения концентрации лактата и мочевины в амниотической жидкости крольчих на 27-28 сутки беременности, подвергшихся гипоксическому воздействую газовой смеси, содержащей 10±2% кислорода и 90±2% азота в течение 60 минут.

На фиг. 4 представлены результаты проведения ROC-анализа (receiver operating characteristic) отношения концентрации лактата и мочевины в амниотической жидкости у крольчих на 27-28 сутки беременности, подвергшихся гипоксическому воздействию газовой смеси, содержащей 10±2% кислорода и 90±2% азота в течение 60 минут.

На фиг. 5 представлены результаты проведения ROC-анализа отношения концентрации лактата и мочевины амниотической жидкости крольчих на 27-28 сутки беременности, подвергшихся гипоксическому воздействую газовой смеси, содержащей 10±2% кислорода и 90±2% азота в течение 60 минут для определения диагностического порога отношения концентрации лактат/мочевина с целью диагностики гипоксии.

К фигурам 1, 2 и 3 имеется примечание: Данные представлены в виде среднего ± стандартного квадратического отклонения; достоверность межгрупповых различий рассчитана по t-критерию Стьюдента.

В заявляемом способе используют:

1. Оборудование

1.1. Автоматический дозатор с диапазоном дозирования 10-200 мкл - 1 шт.

1.2. Анализатор лактата «Biosen С line» фирмы «EKF» (Германия).

1.3. Автоматический биохимический анализатор «Dimension Xpand» («Siemens», Германия).

2. Вещества и материалы

2.1. Одноразовые стерильные пластиковые или стеклянные пробирки без антикоагулянта.

2.2. Одноразовые пластиковые наконечники для автоматического дозатора.

2.3. Реагенты фирмы «Siemens» (США) «BUN Urea Nitrogen Flex reagent cartridge» (кат. № B4309) для определения концентрации мочевины кинетическим ферментативным (уреазным) методом.

Для осуществления заявляемого способа беременных крольчих породы Шиншилла возрастом 1-2 года массой 4-5 кг на сроке беременности 27-28 суток помещают в гипоксическую камеру, содержащую 10±2% кислорода и 90±2% азота на 60 минут. После чего крольчих забивают. Через 15 минут проводят гистерэктомию, вскрывают плодные мешки и забирают образцы амниотической жидкости. Отбор экспериментальных плодов в группах сравнения осуществляют таким образом, чтобы масса плода и масса плодной части плаценты, а также объем амниотической жидкости не различались (фиг. 1). В образцах амниотической жидкости определяют концентрации лактата и мочевины (фиг. 2). Рассчитывают отношение концентрации лактат/мочевина (фиг. 3). При отношении концентрации лактат/мочевина более 2,0-2,5 ммоль/л (фиг. 4) в амниотической жидкости диагностируют гипоксию плода. Величина 2,0-2,5 ммоль/л установлена экспериментально (фиг. 5).

Заявляемый способ обладает высокой точностью проведения исследования, поскольку учитывает повышение концентрации основных компонентов амниотической жидкости при гипоксии плода, и найдет применение для моделирования общей пренатальной гипоксической гипоксии плода и испытании антигипоксических лекарственных средств.